Enterokinase recombinante y enterokinase bovino recombinante

Enterocinasa recombinante y enterocinasa bovina recombinante

Enterocinasa recombinante

Descripción del producto

La enteroquinasa bovina recombinante producida en E. coli es una única cadena polipeptídica glicosilada que contiene 235 aminoácidos y que tiene una masa molecular de aproximadamente 28 kDa.

Principales características

RECOMIENDA CONDICIÓN DE USO:

1) Condición de corte: 25 mM Tris-HCl 8.0

Concentración de proteína de fusión: 0.1-1 mg / ml (contenido total de proteína: 50-100ug)

Contenido de EK: 0.1-0.2U

Temperatura: 25 ℃

Tiempo: durante la noche o 16h-24h para la digestión.

Si la digestión es a 2-8 ° C, prolongue el tiempo de digestión dos veces o agregue más enzima para acortar el tiempo de digestión.

2) condiciones de digestión a baja temperatura de 4 ° C:

4 ° C puede digerir eficazmente el sustrato, pero necesita extender el tiempo de digestión a 48-64 h, o aumentar la cantidad de 2-3 veces la cantidad de enzima.

3) Optimización y amplificación de la escisión enzimática

Optimización: las condiciones de escisión enzimática pueden optimizarse, tales como el pH del tampón, la concentración de proteína de fusión, la cantidad de EK y el tiempo de digestión, de modo que la proteína de fusión pueda digerirse en condiciones estables, detección SDS-PAGE del efecto de digestión.

Amplificación: seleccione las condiciones de reacción optimizadas, de acuerdo con las condiciones tales como la proporción de amplificación, detección por SDS-PAGE del efecto de digestión.

4) Método para eliminar enterocinasa recombinante: la enterocinasa recombinante se eliminó usando cromatografía de afinidad con inhibidor de tripsina (por ejemplo, sigma T0637).

5) Nota: no recomendamos cortar en condiciones de 37 ° C, puede haber una digestión enzimática no específica.

C OMMON COMPONENTES INFLUYEN EN LA ACCIÓN DE ENTEROKINASE

> 200 mM de imidazol o> 200 mM de NaCl o> 5% de glicerina, la reacción puede verse afectada. Se dan las siguientes sugerencias:

1) Para recibir el resultado óptimo, por favor dialice la muestra a 25 mMTris-HCl, pH 8.0.

2) Si la diálisis es inconveniente, diluya la muestra a <100mM de imidazol, <50mMNaCl, <5% de glicerina, y la proporción de proteína de fusión y EK no se puede cambiar (1U: 0,5 mg de proteína de fusión).

3) Si hay uno o más componentes en las muestras, y no se pueden eliminar, sugiera aumentar el contenido de EK en el sistema de reacción o extender el tiempo de reacción.

Información del Producto

Definición de la unidad

Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 500 μg de proteína de fusión en 16 horas hasta el 95% de terminación a 25ºC en un tampón que contiene Tris-HCl 25 mM, pH 7,6, NaCl 50 mM y CaCl2 2 mM.